产品简介

Cyanine 5（Cy5），是花青素荧光素染料家族的成员之一，是化学合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以两种异构体的形式供货，一种是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一种是磺化花青素（sulfonated cyanine）。两者的光谱性质几乎一致，因此大部分应用可相互替换，比如，都可用于标记DNA或蛋白等生物分子。两者的主要区别在于：磺化染料是水溶性的，在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂，并且降低染料在水中聚集的可能性，增强标记效率。

本Cyanine 5（Cy5）是以磺化染料的形式供货，易溶于水，Ex=649 nm，Em=670 nm，具有明亮荧光，光稳定性强，pH非敏感性等优点，适用于标记多肽、蛋白以及核酸等生物分子，以通过后续荧光成像以及其他荧光生物学方法分析目的蛋白。

本Cy5 NHS ester，即含N-羟基琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基团的Cy5，可直接与生化分子上的氨基（-NH2）反应形成稳定的酰胺键，主要是伯胺。

产品信息

产品性质

储存条件

-15~-25℃干燥避光保存，有效期1年。

使用方法

以下实验方法仅供参考，请客户根据文献进行调整。

1. 准备蛋白储备液（Solution A）

将100 µL的反应缓冲液（例如，1 M碳酸钠溶液或1 M PBS缓冲液，pH 9.0）与900 µL的目标蛋白质溶液（例如，抗体。若蛋白质浓度>2 mg/mL可达到更好的效果）混合，得到1 mL的蛋白质标记储备溶液。
注意：蛋白质溶液（Solution A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，使用1 M碳酸氢钠溶液或1 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整到8.0-9.0的范围。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须在1×PBS（pH 7.2-7.4）中透析，去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。若含有牛血清白蛋白（BSA）或明胶等物质，抗体将无法很好地标记。钠叠氮化物或硫柳汞的存在也可能干扰结合反应。可以通过透析等方式去除钠叠氮化物或硫柳汞，以获得最佳的标记结果。如果蛋白质浓度低于2 mg/mL，结合效率会显著降低。为了获得最佳的标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg/mL。

1. 准备Cy5 NHS Ester储备液（Solution B）

将无水DMSO加入到Cy5 NHS Ester小瓶中，制成10 mM的储备溶液。通过移液器或涡旋混合均匀。

注意：Cy5 NHS Ester储备液尽量现配现用。储备液配置完成请尽快使用。储备液的长期储存可能会降低染料活性。Solution B可以在避光和防潮的情况下在冰箱中储存两周。避免反复冻融循环。

3. 将Solution B（染料）和Solution A（蛋白质）以10：1的摩尔比混合。如Solution B为10 mM，将5 µL的Solution B加入到含有95 µL Solution A的瓶中，并摇动混合。注意：可根据客户使用情况对储备液的比例进行调整。

4. 在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5. 将反应混合物上样到 1.5 mL Sephadex G-25 柱上，并通过离心洗脱Cy5染料结合的蛋白。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20250319